这支 CD68，只写了小鼠和大鼠

Anti-CD68，兔多抗，IHC-Fr 与 IHC-P 都能做，人源不在范围

课题做的是人源肿瘤移植到小鼠，片子上一半是人组织，一半是小鼠间质。

CD68 染完，肿瘤实质里干净，间质里一片棕色。

同学以为是种属交叉的问题，把抗体浓度降了一半，间质的棕色还在。

这支抗体的种属栏里，本来就没有人。

种属栏要先看

产品页写得很清楚，反应种属是小鼠和大鼠。

人源样本不在范围内。这不是抗体好坏的事，是免疫原选的那段序列在人里对不上。

人源肿瘤的小鼠移植模型里，人的巨噬细胞和小鼠的巨噬细胞同时存在。用这支染，看到的全是宿主来源的那一部分。

要同时看两侧，人源标记和鼠源标记得分开用，不能指望一支抗体全包。

买抗体之前先把种属栏对一遍。课题里换模型、加一个物种，最先作废的就是抗体。

两个 IHC 系统

验证系统写的是 IHC-Fr 和 IHC-P，加上 WB。

冰冻切片做 CD68 是常规选择，膜蛋白和溶酶体相关的表位在冰冻切片里保存得更好。

石蜡切片也能做，但要过抗原修复，修复过头会把溶酶体颗粒的形状煮散。

两个系统的切片不要放在一张图里比较深浅。固定方式、切片厚度、显色时间都不同，深浅不具可比性。

判读看颗粒不看整片

CD68 主要定位在溶酶体上，阳性是胞质里的粗颗粒，不是均匀的一片。

巨噬细胞铺开的时候，颗粒散在胞质的突起里；圆形贴壁的细胞，颗粒挤在核旁。

肿瘤相关巨噬细胞常常贴着肿瘤巢的边界排，低倍下像一道断续的深色线。

计数的时候按面积算密度，别按视野数。不同样本的肿瘤实质和间质比例差得多，视野数没有可比性。

背景重的时候先看核上有没有棕色沉积。核着色说明封闭不够，不是抗体的特异信号。

阳性细胞的判定以颗粒为准。胞质里有一层淡棕但没有任何颗粒的细胞，算阴性。

内源过氧化物酶和封闭

做 DAB 显色，内源过氧化物酶是绕不开的一层。

组织里中性粒细胞和红细胞都带这类酶，显色前用 3% 过氧化氢处理十分钟，能压掉大半。

封闭血清和二抗宿主要配套，兔源一抗用羊抗兔二抗，封闭就用正常羊血清。

双标的时候，第二个通道选一个离得远的荧光，CD68 的颗粒信号本来就宽，通道太近会糊在一起。

石蜡和冰冻的片子不能放在同一组数据里。固定方式不同，颗粒的形态也不同，一个是细点，一个是粗块。

下一批切片，人源标记和鼠源标记各配一支，同一张玻片上做双标，先确认间质那一片棕色到底是谁的。

关键参数

反应种属	Mouse, Rat
抗原名称	CD68
验证应用	WB, IHC
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Polyclonal
纯化方式	Affinity purification Immunogen
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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