鸡来源的 GFAP，双标正好用
Anti-GFAP，鸡多抗 IgY，WB、IHC-P、ICC/IF、冰冻漂浮片
反应性星形胶质细胞的形态，要看突起怎么包住损伤灶。
要做双标，另一支是兔源的 NeuN。同学手上只有羊抗兔和羊抗鼠两种二抗。
找一支鸡源的 GFAP，这个问题就绕开了。
GFAP 的抗体多数是兔源，跟 NeuN 撞宿主，撞了就得分染或者做酪胺放大。
鸡 IgY 的好处
鸡的免疫球蛋白叫 IgY，和哺乳动物的 IgG 在结构上差得远。
抗鸡的二抗不会认兔 IgG，也不会认鼠 IgG。三标、四标的时候，多一个宿主就多一个通道。
代价是二抗的选择少一些，抗鸡的荧光二抗要单独订。
IgY 不带 Fc 介导的补体结合，做活细胞或者组织孵育的时候非特异结合相对少。
订二抗的时候要看清是抗鸡 IgY 还是抗鸡 IgG，两者不通用，买错了孵育一夜也不会有信号。
四种验证系统
这支的验证系统铺得很开，WB、IHC-P、ICC/IF、冰冻漂浮片都做了。
冰冻漂浮片这一项对脑片做得多的人有用。切片不贴在玻片上，直接在孔板里漂浮孵育，抗体从两面进，穿透比贴片好。
反应种属写的是小鼠和大鼠，人源样本不在范围里。
人源组织做 GFAP 要另找一支。这不是抗体质量问题，是免疫原序列在不同物种间有差异。
多克隆，鸡宿主，产品页没给固定稀释比。
星形胶质细胞的判读
GFAP 染的是中间丝，胞体和突起都着色。静息态的星形胶质细胞阳性弱，突起细。
激活之后胞体变大，突起变粗，染色明显变深。损伤灶周围会形成一道胶质瘢痕。
判读的时候看突起的分支层次，不要只看深浅。深浅受曝光影响，分支形态不受。
双标的时候，两个通道的曝光分开调，先把弱的那个调好，强的那个再压下来。
胶质瘢痕的边缘在哪，靠连续切片看几层才准。单张切片上觉得突起包住了损伤灶，换个层面可能就断了。
共定位不要只放合并图，单通道原图一起放，审稿人看的是这个。
操作上的两点
IHC-P 的修复条件产品页没有写死，柠檬酸和 Tris/EDTA 都试一张，选背景低的。
冰冻漂浮片做完之后贴片，贴的时候从低浓度乙醇开始脱水，直接上高浓度容易卷。
抗鸡二抗的浓度比抗兔二抗普遍要高一档，第一次用先按说明书的上限试。
封闭血清的种属要和二抗的宿主一致。抗鸡二抗是羊来源，封闭就用正常羊血清，用错血清等于没封闭。
下一批双标，GFAP 和 NeuN 分开孵育，二抗一个抗鸡一个抗兔，中间加一步 10% 正常羊血清封闭，第二天一起拍。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | GFAP |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC, IHCFl |
| 宿主/亚型 | Chicken / IgY |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 +4°C |
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