LAMP1 只写了人源，别拿去染小鼠
Anti-LAMP1，兔多抗，溶酶体标记，WB 与 IHC-P 验证
小鼠的脑片染 LAMP1，荧光下什么都没有，只有一层均匀的绿。
同学以为是灌注固定的问题，换了三种固定液，还是空的。
翻产品页的时候才发现，种属那一栏只写了人。
种属这一栏最容易被跳过
买抗体的时候大家看靶点、看应用、看稀释比，种属经常扫一眼就过去了。
这支的种属只有 Human。
小鼠和大鼠的 LAMP1 序列和其他物种有差异，这支认不上。不是染色条件的问题，条件再怎么优化也染不出来。
做小鼠样本要另找一支。同一个靶点，不同克隆的种属覆盖不一样。
课题里如果同时有人源细胞和小鼠模型，抗体的清单要按物种分开列。
种属写 Human 的抗体，偶尔能在猴或者猪的样本上出一部分信号，这种偶然不能当依据，写进文章会被追问。
溶酶体标记怎么用
LAMP1 是溶酶体膜上的糖蛋白，一个跨膜蛋白，C 端朝向胞质。
免疫荧光上，阳性是胞质里的点状或环状结构，不是弥散的一片。
溶酶体的数量随细胞状态变化。饥饿之后溶酶体增多，点状信号变密；有些处理会让溶酶体聚集到核周。
拍共聚焦的时候把层厚压薄。溶酶体是立体的，厚层扫下来一堆点叠在一起，数不出个数。
和 LC3B 一起看，能分出是自噬体多了还是溶酶体多了。两个标记的定位不一样，合并的时候看共定位的比例。
背景重的时候，先看核内有没有信号。LAMP1 不进核，核里出现荧光说明抗体有问题。
WB 上的条带
LAMP1 高度糖基化，跑出来的带比理论分子量宽。
不同细胞类型的糖基化程度不同，同一位点在两种细胞里可能差出十几千道尔顿。
看到一条宽而毛的带是正常的，不要当成降解。
样本处理也会改变条带形态。裂解液的去垢剂强弱不同，膜蛋白的溶解度不同，同一批样本换一种裂解液，带形就会变。
做定量的时候，把整条带的灰度加起来算，别只框最亮的那一段。
上样量按总蛋白定，和内参一起跑。溶酶体蛋白在有些处理下整体升高，内参要选一个不跟着变的。
切片上的判读
IHC-P 染 LAMP1，阳性在胞质，颗粒状，密集的地方看着像一片，高倍下能分出一个个小点。
肿瘤细胞里的溶酶体常常比正常细胞多，这个差别在低倍下就能看出来。
判读先定阈值，再看阳性细胞的比例，不要凭印象说强弱。
人源组织的阳性对照好找，肝细胞和巨噬细胞都很明显。
下一批实验，把小鼠那部分换成另一支验证过小鼠的 LAMP1，人源细胞继续用这支，两套数据分开统计。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | LAMP1 |
| 验证应用 | WB, IHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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