Caspase-3 剪切带，先诱导再看
Anti-Cleaved Caspase-3 [E83-77]，WB 1/500
凋亡的实验，膜上该出现两条带的位置是空的。
同学把抗体浓度从 1/500 提到 1/100，曝光从 30 秒拉到 10 分钟，还是一片白。
他用的样本是正常培养的细胞，没有做任何凋亡诱导。
这支抗体只认剪切后的片段，前体它不认。
为什么正常样本是空的
Caspase-3 在细胞里以酶原形式存在，分子量大，平时没有活性。
凋亡启动之后，酶原被剪成大小两个片段，才有活性。
这支抗体的免疫原就是剪切后形成的新表位，酶原上没有这一段。
所以正常细胞里检不到信号，不是抗体不行，是靶点不存在。
同理，做细胞染色的时候也不能拿未诱导的细胞当阳性对照。阳性对照必须是确定发生了凋亡的样本。
产品页专门写了一句，前体只有在凋亡发生时才被剪切，要检测活性形式，强烈建议先把样本诱导进凋亡通路。
阳性对照怎么设
诱导剂的选择按模型来。星形孢菌素、放线菌酮、顺铂，都是常用的。
时间点做三个，比如 4 小时、8 小时、12 小时，看什么时候出现带。
诱导之后先看形态和 Annexin V，确认凋亡真的发生了，再跑 WB。
剂量给高了，细胞直接走坏死，剪切反而做不出来。诱导剂的浓度也要摸，不是越高越好。只跑 WB 不看表型，容易把坏死当成凋亡。
诱导的时间点也要错开。同一批细胞在不同时间收，剪切的量差得多，收早了看不到带，收晚了细胞已经碎了。
阳性对照的裂解液可以分装冻起来，以后每次跑胶带一孔。
这支抗体的条件
靶点是 CASP3，反应种属写的是人。
宿主兔，单克隆，克隆号 E83-77。验证系统是 WB 和 ICC/IF。
WB 给 1/500，ICC/IF 给 1/100 到 1/250。
两个系统的浓度差一档，因为细胞样本的靶蛋白量比组织裂解液少。
没有 IHC 的验证，做切片定位要另找一支。
判读的细节
WB 上看到的是剪切后的片段，不是酶原。位置比对的时候别拿酶原的分子量去对。
诱导之后如果只出现一条带，先看胶的浓度够不够，两个片段有时候分不开。
ICC/IF 上阳性在胞质，靠近核周，颗粒状。核内出现信号要怀疑非特异。
凋亡细胞会皱缩，形态和正常细胞差别很大，拍图的时候把相差图一起拍。
阳性细胞的计数按视野里的总细胞数算比例，只报阳性个数说明不了强度，也说明不了发生率。
下一批实验，先做 4、8、12 小时三个诱导点，每个点配一孔不加一抗的对照，跑完再看信号出现在哪个时间。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | CASP3 |
| 验证应用 | WB, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | WB 1/500 The pro-caspase-3 is cleaved only when apoptosis event occurs. So, in order to detect active Caspase-3, we strongly suggest to induce your samples into apoptotic pathway.；ICC/IF 1/100 - 1/250 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。