HMGB1 的条带该在 25 kDa

HMGB1 兔多抗，25 kDa，WB 与 IF

做焦亡模型，收集上清跑 HMGB1。预期在 25 kDa 附近看到一条带，实际什么都没有，反而在细胞裂解液里很强。

上清里的 HMGB1 是释放出去的那部分，量取决于释放效率。细胞裂解液里的主要是核内储存的那部分，本来就多。

两条线一个多一个少，不是抗体偏袒，是分布本来就这样。

它在两个位置干两件事

HMGB1 在核内是染色质结合蛋白，参与 DNA 的弯曲和转录调控。这一部分占细胞总量的绝大多数。

受到刺激后它可以被释放到胞外，变成一种损伤相关分子，跟受体结合引发炎症。

释放的机制不止一种。焦亡时细胞膜破裂，内容物直接洒出去；凋亡时核内的 HMGB1 会结合得更紧，反而不释放。这个差别是实验设计要考虑的。

这个差别在实验设计里很实用。测释放看上清，测总量看裂解液，两边都收才能分清是释放增加还是表达增加。

这支的事实

兔多抗，IgG，不带标记。反应种属写了人、小鼠、大鼠三个。

应用只列了两项，WB 和 IF/ICC。没有 IHC，做石蜡切片的话得另找货号。

分子量标的是 25 kDa，编号 P09429。这两个信息写在产品页上，判读的时候可以直接对。

多抗做 WB 的优点是耐受降解。HMGB1 在某些条件下会被切，多抗识别多个位点，切掉一段还剩信号。

IF 做核内定位，通透要充分。HMGB1 结合染色质，通透不足只在核里看到一团，看不出分布变化。

25 kDa 这条线怎么看

跑出来的位置明显高于 25 kDa，可能是翻译后修饰，也可能是二聚体没还原开。

样本里加足量还原剂，煮沸十分钟再上样。HMGB1 含半胱氨酸，氧化状态下会形成二聚体，位置翻倍。

位置低于 25 kDa，多半是降解。组织样本尤其常见，取材后没及时冻，蛋白酶把蛋白切了。

判读的时候拿重组蛋白做一条对照泳道，位置对上再谈表达差异。

还原剂用 DTT 或者巯基乙醇都行，终浓度别省，煮沸时间给够。

三条操作建议

做 IF 时，核内的 HMGB1 信号很强。要看释放，得把胞质和胞外的信号单独圈出来，别整个视野一起算平均强度。

WB 上清样本要先浓缩，不浓缩上样量不够，弱信号看不出处理组之间的差别。

三个种属都能用，做跨种属实验时先拿阳性组织验一张，别直接批量跑。

上清浓缩用超滤管，别用沉淀法。沉淀法回收率不稳，小分子量蛋白容易丢。

下次收样本，细胞层和上清分两管冻，标注清楚，判读时两条线一起看。

关键参数

反应种属	Human, Mouse, Rat
抗原名称	HMGB1
验证应用	WB, IF/ICC
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Polyclonal
纯化方式	Affinity purification Immunogen
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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品牌	货号	品名
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