产品性能解析 · Abcam

这支只认人源样本

兔单抗，敲除验证，WB 1/5000

Abcam · 货号 Ab32351

这支只认人源样本

小鼠胸腺细胞地塞米松处理六小时，收蛋白，跑胶，Caspase-3 的位置干净得反常。

阳性对照那管人细胞系有条带，说明胶和试剂都没问题。

翻产品页，反应种属只写了 Human。这支是人的，小鼠样本不在验证范围内。

图 1　免疫组化验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

前体和剪切片段是两回事

Caspase-3 做成酶原的时候是一条完整的链，激活要靠上游酶切，切完变成大小两个片段。

做凋亡，WB 上通常能看到两个位置，一个对应酶原，一个对应剪切后的片段。判断凋亡有没有发生，看的是片段那一块有没有出现、有没有变深。

只盯着酶原那条带，会把表达量没变误读成没有凋亡。这两件事在凋亡早期经常同时成立。

剪切片段分子量小，转膜容易穿过去，做凋亡 WB 用 0.2 µm 的膜。

做组织切片也一样。正常组织里酶原占多数，损伤或者肿瘤区域才会出现明显的片段信号，读片要结合形态，不要只看颜色深浅。

兔单抗，克隆号 E87，IgG，无标记，Protein A 纯化。

反应种属只有人。应用列了 WB、IHC、FCM、IF/ICC、IP 五项。

稀释比很宽，WB 1/5000，IHC-P 1/25 到 1/100，ICC/IF 1 µg/mL，流式胞内 1/180 到 1/1000，IP 1/10 到 1/50。IHC 需要热修复。

产品页写明做过敲除样本验证。凋亡通路里同源蛋白多，交叉反应是常见坑，这一条对做凋亡的人有用。

产品页给了对应的同型对照货号，做流式胞内染色时同型对照要一起买。

缓冲液含 40% 甘油和 0.05% BSA。

种属。人源细胞系、人源类器官、人组织切片都在范围内。小鼠、大鼠样本要另找货号。

片段还是全长。做凋亡检测，胶的浓度要能分开两个位置，跑短了会并成一条。

胶的浓度按片段大小定，12% 到 15% 之间，跑太短两个位置会并成一条。

样本量。WB 1/5000，这支很浓，一支能跑很多板，别按常规 1/1000 加。

人源类器官切片同样适用，固定时间控制在 24 小时内，过固定会让胞质表位变弱。

做凋亡时间梯度，处理 2、4、8 小时各收一管，一起跑，看片段什么时候出来。

IHC 用 1/50 起，柠檬酸修复，凋亡细胞散在分布，低倍镜下先扫一遍再拍高倍。

流式做胞内染色，固定破膜后用同型对照，产品页给了对应的同型对照货号。

下次收样，蛋白量按 30 µg 上，别为了省样本把上样量压到 10 µg。

反应种属	Human
抗原名称	CASP3
验证应用	WB, IHC, FCM, IF/ICC, IP
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Monoclonal
纯化方式	Affinity purification Protein A
推荐稀释	IHC-P 1/25 - 1/100 Perform heat-mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/5000；ICC/IF 1 µg/mL For unpurified, use 1/25 dilution.；Flow Cyt (Intra) 1/180 - 1/1000 ab199376 - Rabbit monoclonal IgG, is suitable for use as an isotype control with this antibody.
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

图 2　免疫组化验证结果（图源：Abcam 官网产品页）