127 kDa 上面那条是什么

兔多抗，成熟体 127 kDa

做上皮间质转化的模型，收蛋白跑 N-cadherin，127 kDa 的位置有带，上面还有一条更高的。

换了更强的还原条件，加了更多还原剂，高的那条没消失。

产品页写得很清楚，N-cadherin 先做成前体，在高尔基体被 furin 切开，成熟体是 127 kDa。上面那条是还没切的前体。

图 1　Western blot 验证结果（图源：proteintech 官网产品页）

前体、成熟体和糖基化

N-cadherin 是钙依赖的黏附分子，负责细胞与细胞之间的连接。

合成出来是一条前体，运输到高尔基体时被 furin 蛋白酶切，变成成熟形式再送到膜上。

它还会被酪蛋白激酶 II 磷酸化，也会被 N-糖基化修饰，这两个修饰会让条带位置上移一点。

所以 WB 上看到的位置不完全等于理论分子量，判断标准是相对位置，不是绝对值。

组织裂解液里前体的比例比细胞系高。组织里运输和加工的节奏不一样，条带形状会跟着变。

这支的事实

兔多抗，IgG，未偶联，抗原亲和纯化。缓冲液是 PBS 加 0.02% 叠氮钠和 50% 甘油，pH 7.3。

产品页写的是成熟体 127 kDa，做组织样本时高于这个位置的带同样要记录。

免疫原是重组人 N-cadherin，大肠杆菌表达，GST 标签，覆盖 421 到 535 位。这一段位于胞外区。

种属写了人、小鼠、大鼠。应用列了 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IF-P、IF-FRO、IP 共七项。

产品页给了 RRID。-20°C 保存，一年内稳定。

产品页没有给稀释比。

做转化模型时的判读

上皮细胞转成间质表型，N-cadherin 上调，E-cadherin 下调。这两个变化方向相反，放在同一块膜上跑最有说服力。

组织里前体的比例高，组织样本高位那条带不能当非特异，先看样本类型再判断。

上调的幅度常常不大，两倍左右，曝光要留余地，不要让条带饱和。

组织样本里，N-cadherin 在神经组织和心脏里表达本来就高，选阳性对照时避开这两类。

做 IF 先通透，膜蛋白在细胞连接处富集，通透过度会把边界洗散。

IF 做膜定位，Z 轴多切几层，黏附连接在细胞间接触面，单层平面容易漏。

三条操作建议

WB 上样 30 µg，胶浓度 6% 到 8%，127 kDa 和更高的前体要能分开。

裂解液里加 1 mM 钙离子，钙依赖黏附分子在无钙条件下会降解。

IHC 用 EDTA pH 9.0 修复，膜染色在修复不足时几乎看不到。

下次跑胶，同一块膜上加一管过表达细胞做位置标记。

关键参数

图 2　Western blot 验证结果（图源：proteintech 官网产品页）

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