CD4 这支只认人
兔单抗 [EPR6855]，仅人样本，五类应用
人的 PBMC 做流式，CD4 单染，圈门时发现阳性群拖了一条尾巴。
样本换成一管小鼠脾细胞，同一个方案，什么都没有。
翻产品页，种属那一栏只写了 Human。
抗体不认鼠的 CD4，不是染得不好，是根本没有靶点。
种属一栏只有人
做跨物种实验之前，先看这一栏，比看应用列表更重要。
这支的种属只写了人，小鼠、大鼠都不在列，人源化小鼠模型要看用的是人源细胞还是鼠源细胞。
如果样本是人源细胞移植到鼠体内，染色时只有人细胞那部分会亮，鼠的基质细胞不亮。
这个差异本身有用，可以拿它算嵌合率，但前提是你知道自己在看什么。
反过来说，做纯小鼠样本时不必试这支，直接换一支种属明确写了小鼠的，省下摸索的时间。
人源化小鼠的脾细胞里人细胞比例常在个位数，染完先看人 CD45 那一群，再在里面看 CD4，比例才准。
这支的事实
兔单抗，克隆号 EPR6855，IgG，无标记，Protein A 亲和纯化。
应用列了 WB、IHC-P、ICC/IF、流式胞内、mIHC 五项，分子量 49 kDa。
缓冲液是 PBS 加 40% 甘油和 0.05% BSA，pH 7.2 到 7.4，含 0.01% 叠氮钠，-20°C 可稳定十二个月。
产品页提到有小规格试用装，第一次用不必直接买大包装。
免疫原信息产品页写的是专有信息，没有公开具体肽段。
膜蛋白做胞内染色的顺序
产品页写的流式验证是胞内染色，不是表面染色，这一点容易看漏。
表面染色把抗体加在活细胞上，4°C 孵育，全程避光，避免内吞。
胞内染色要先固定再通透，通透剂用皂苷或 Triton，之后所有缓冲液里都要含同样的通透剂，否则抗体进不去。
固定时间不要超过十五分钟，多聚甲醛放久了交联过度，膜蛋白的抗体进不去。
CD4 是膜蛋白，通透之后表位可能受影响，胞内染会比表面染弱一档，属正常现象，不用怀疑抗体掉效价。
如果只想看表面 CD4，走表面染色就行，别为了用这支专门做胞内，步骤多一步，信号反而弱一档。
三条操作建议
表面染 CD4 时，每 10^6 细胞用 0.5 到 1 µg，4°C 三十分钟，避光。
固定用 1% 多聚甲醛十分钟，别用甲醇，甲醇会把膜蛋白表位打掉。
做 IHC 时，人扁桃体或淋巴结是最好的阳性对照，T 细胞区应该成片阳性，一眼能判断。
下次配一管同型对照，兔 IgG 同浓度同体积，把门画在对照管的右侧。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | CD4 |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab133616 | Anti-CD4 antibody [EPR6855] 本文产品 |
| Abcam | Ab183685 | Anti-CD4 antibody [EPR19514] |
| Abcam | Ab10558 | Anti-CD45 antibody |
| Abcam | Ab157107 | Anti-CD44 antibody |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。