DCX 的种属清单里没有人

产品性能解析 · Abcam

DCX 的种属清单里没有人

兔多抗,鼠与鹌鹑,41 kDa,五个应用

Abcam  ·  货号 Ab18723

DCX 的种属清单里没有人

成体小鼠海马做切片,齿状回颗粒下层想找新生神经元,DCX 是最常用的标记。

染出来阳性细胞贴着颗粒层排列,突起朝分子层方向伸,形态很干净。

想在人脑组织上做同一件事,翻种属那一栏,发现没有人。

换人样本之前必须换抗体,这支的清单里只有小鼠、大鼠和鹌鹑。

免疫组化 验证结果
图 1 免疫组化 验证结果(图源:Abcam 官网产品页)

齿状回那一条带

WB 上 DCX 主带在 41 kDa,产品页给的分子量就是这个数。

发育中的脑组织信号强,成年脑弱,做 WB 要加大上样量或者先富集海马。

DCX 有多种剪接形式,条带有时是双线,定量以主带为准。

降解产物在 30 kDa 附近,样本新鲜度不够时那条会变深,别把它当成第二个靶点。

取海马时把皮层削干净,皮层里的 DCX 会污染时间序列,尤其是发育早期的样本。

做成年脑的时间序列,海马要新鲜取材,冰上超过半小时 DCX 的信号会掉一截。取样顺序上把海马排在第一批,切完立刻液氮冻存,别在冰上排队。

这支的事实

兔多抗,IgG,无标记,抗原亲和纯化,免疫原信息产品页没有公开。

种属是小鼠、大鼠、鹌鹑,应用列 WB、IHC-P、IHC-Fr、IHC-FoFr、ICC/IF 五项。

规格 50 µg,量不大,做切片时按每次用量分装,别整管反复取。

缓冲液是 PBS 加 1% BSA,pH 7.4,含 0.02% 叠氮钠。

多抗批间差异存在,做一整个发育时间序列时尽量用同一个批号。

漂浮切片和石蜡的差别

IHC-FoFr 是经心脏灌注固定后的漂浮切片,形态保留最好,适合数突起。

石蜡切片做抗原修复,柠檬酸 pH 6.0 微波十五分钟,修复过头阳性细胞会缩。

漂浮片封闭用含 5% 正常山羊血清的 PBS 加 0.3% Triton,一抗 4°C 孵育过夜。

两种切片上阳性细胞数不能直接比,处理方式差太多,只能各自和自己的对照组比。

灌注固定用 4% 多聚甲醛,灌注不充分时脑中心固定不透,漂浮片染出来外深内浅,看着像分层。

漂浮片封片用抗淬灭封片剂,普通甘油封完放一周信号就淡。

三条操作建议

一抗稀释比产品页没有给,漂浮片从 1/500 起,石蜡片从 1/200 起,按背景调。

数细胞时固定一个计数框,颗粒下层每平方毫米多少个,别只拍图说多。

做双标时注意二抗的种属搭配,这支是兔源,另一支别也用兔源。

下次同一只鼠的脑,左半球做漂浮,右半球做石蜡,直接比两套流程的差异。

关键参数

反应种属 Mouse, Rat, Quail
抗原名称 DCX
验证应用 WB, IHC, IF/ICC, IF-FRO
宿主/亚型 Rabbit / IgG
抗体类型 Polyclonal
纯化方式 Affinity purification Immunogen
储存条件 短期 +4°C;长期 -20°C
免疫组化 验证结果
图 2 免疫组化 验证结果(图源:Abcam 官网产品页)

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