42 kDa 那个位置很挤
鼠单抗 IgG1，六个种属，42 kDa，两个规格
同一块胶跑了八个样本，actin 齐得像尺子画的，看着很放心。
回头查曝光，最亮的那条已经到了饱和区，被压下去的两条本来有差异。
内参的用处是证明上样一致，前提是它落在仪器的线性范围里。
齐不齐，看灰度值，不看眼睛。
42 kDa 那个位置很挤
β-actin 在 42 kDa，这个位置附近常挤着别的蛋白，尤其是样本里高丰度的代谢酶。
如果目标蛋白也在这个区间，换一个内参，或者把胶的浓度调一调，让两者分开。
ACTB 有多个异构体，不同组织的表达量差得不少，肌肉和心肌里尤其高。
用 actin 做内参，最稳妥的是同一个实验里只比同类样本，跨组织比要小心。
细胞系样本里 actin 很稳，组织样本要先跑一次全组织谱，看目标组织有没有异常高表达。
肌肉和心肌的 actin 特别高，上样量要减半，否则同一块胶上其他泳道会过曝。做细胞系样本时这条可以忽略，actin 表达比较平均。
这支的事实
鼠单抗，克隆号 mAbcam 8224，IgG1，无标记，亲和纯化。
种属列了人、小鼠、大鼠、果蝇、酵母、非洲爪蟾六个，覆盖面很宽。
应用是 WB、IHC-P、ICC/IF 三项，分子量 42 kDa，规格有 100 µg 和 250 µg 两种。
缓冲液是 PBS 加 6.97% L-精氨酸，pH 7.4，含 0.02% 叠氮钠，不含甘油。
精氨酸是帮抗体稳定的，稀释到工作浓度后当天用完，别隔夜放着。
如果同一块膜还要染磷酸化蛋白，actin 的稀释液里别加牛奶，用 BSA 更省事。
产品页提到有去载体蛋白的版本，适合自己标记荧光或者做偶联。
内参也要看线性范围
上样量从 10 µg 到 40 µg，actin 的灰度不一定线性增加，超出范围就饱和。
曝光时间也一样，先跑一个梯度曝光，选信号落在中段的时长。
定量时用目标蛋白除以同一条泳道的 actin，别用不同胶上的 actin 互相比。
如果目标蛋白的变化幅度可能超过两倍，actin 不够用，得换总蛋白染色做归一。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，从 1/5000 起试，actin 丰度高，浓度大了背景糊。
封闭用 5% 脱脂奶粉，室温一小时，TBST 洗三次。
L-精氨酸缓冲液在低温下可能析出，用前回温并轻轻混匀，别剧烈振荡。
下次上样做 10、20、30 µg 三档，同一块胶，先确认线性再比组间。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Drosophila, Yeast, Xenopus laevis |
| 抗原名称 | ACTB |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG1 |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。