p21 的阳性细胞总是零散
兔单抗 [EPR362]，敲除验证，五类应用
做药物诱导的衰老模型，p21 的 WB 条带很明显。
换到切片上做 IHC，阳性细胞稀稀拉拉，几十个视野才凑够数。
同一支抗体，两种应用，看到的东西完全不一样。
p21 在组织里的阳性率本来就低，染不出来不等于没诱导成功。
阳性细胞总是零零散散
p21 是细胞周期抑制因子，只有进入停滞的细胞才表达，正常增殖组织里几乎看不到。
组织切片上的阳性率通常在个位数百分比，判断标准是核染，不是胞质。
如果整片胞质发黄，先降浓度或者加长洗涤，别急着算阳性率。
计数按核染细胞占同类细胞的比例算，不要按全片面积算，两种口径差得很远。
组织里 p21 阳性的细胞多集中在腺体周围或损伤边缘，取视野时别只挑热点。
阳性对照选放疗或化疗后的组织，信号容易找。
这支的事实
兔单抗，克隆号 EPR362，IgG，无标记，Protein A 亲和纯化。
种属只写了人，应用列 WB、IHC-P、ICC/IF、流式胞内、IP 五项。
产品页提到特异性在 p21 敲除的 HeLa 细胞里做过 WB 验证。
缓冲液是 PBS 加 40% 甘油和 0.05% BSA，pH 7.2 到 7.4，含 0.01% 叠氮钠，-20°C 可稳定十二个月。
产品页没有给分子量，跑胶时按 18 到 21 kDa 的区间框，用小孔径胶分离。
诱导时间决定看到什么
p21 的诱导分 p53 依赖和非依赖两条路，起效时间不一样。
药物处理四小时和二十四小时，表达量差好几倍，做时间梯度比单点更有说服力。
收样时细胞密度要控制，长得太满会自发进入停滞，p21 自己就上去了，看起来像处理有效。
细胞传代次数多了基础 p21 也会升高，实验用低代次细胞。血清批次换了也要重做一次基线，不然差异说不清。
做流式胞内染，固定通透后染 p21，同时加一个 DNA 染料看细胞周期位置。
p21 阳性的细胞多停在 G1，DNA 含量是二倍体，这个特征能把真阳性从背景里分出来。
流式的抗体量按每管 0.5 µg 起，胞内染信号弱，量少了整群落在阴性区。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，WB 从 1/1000 起，IHC 从 1/200 起。
p21 分子量小，转膜用 0.2 µm 的膜，别用 0.45 µm，容易穿透。
做 IHC 时用 EDTA pH 9.0 高压修复，比柠檬酸更容易出信号。
下次同一个模型收四个时间点，WB 和 IHC 各做一套，别只看一个应用。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | CDKN1A |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, IP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab109520 | Anti-p21 antibody [EPR362] 本文产品 |
| Abcam | Ab109199 | Anti-p21 antibody [EPR3993] |
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| Abcam | Ab6721 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。