GSDMD 要看两条带
兔单抗 [EPR19828]，仅小鼠，54 kDa
焦亡模型，LPS 预处理加尼日利亚菌素刺激，收样跑 GSDMD。
只看到 54 kDa 那条全长带，切割带没有出现。
加长刺激时间，降低上样量，还是没有。
换了一支抗体之后才明白，问题在样本处理，不在抗体。
全长和切割带要分开看
GSDMD 被 caspase 切割后，N 端片段约 31 kDa，是打孔的执行者。
产品页给的分子量是 54 kDa，指的是全长。
如果只看到全长，先确认刺激是否真的激活了炎症小体，阳性对照跑一个经典诱导条件。
切割带的信号通常比全长弱，上样量少的时候容易看不见，曝光时间要给够。
全长条带的强弱不代表焦亡程度，看的是切割带与全长的比值。
31 kDa 附近还有别的蛋白，判读时要对着分子量标记看，别只凭有没有带下结论。
另外，N 端片段会穿孔，样品里若有没裂解的细胞，测出来的切割比例会偏低。
样品煮沸前先超声三次，每次五秒，聚集体打散了条带才干净。
这支的事实
兔单抗，克隆号 EPR19828，IgG，无标记，Protein A 亲和纯化。
种属只写了小鼠，应用只列 WB 和 IP 两项，规格有 100 µL 和 1 mL 两种。
产品页提到特异性在 GSDMD 敲除的 RAW 264.7 细胞里做过 WB 验证。
缓冲液是 PBS 加 40% 甘油和 0.05% BSA，pH 7.2 到 7.4，含 0.01% 叠氮钠。
人样本不在种属清单里，做人源细胞要另找一支。
IP 抓 GSDMD 的注意点
GSDMD 会寡聚化，裂解液里加 1% NP-40 有助于打散聚集体。
N 端片段有膜结合能力，裂解前不要做超速离心去膜，否则会把它丢掉。
IP 后跑 WB，IgG 重链在 50 kDa，正好压在 GSDMD 全长附近，选轻链特异性二抗。
拉下来的样品要还原煮沸，否则寡聚体停在胶的上端，看着像没拉下来。
如果只关心切割，用 IP 反而绕远，直接跑 WB 加长曝光更直接。
切割带始终出不来，换一个刺激条件比换抗体更值得试。刺激前先做 LPS 预刺激四小时，这一步省了后面全白做。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，WB 从 1/1000 起，IP 每管 2 到 4 µg。
刺激后用含 1% SDS 的裂解液直接煮，能同时看到全长和切割带。
上样量按总蛋白 30 µg，切割带弱的话单独上一块胶，曝光拉长。
下次同一批样本跑一块 12% 的胶，把 54 和 31 kDa 都留在胶里。
关键参数
| 反应种属 | Mouse |
| 抗原名称 | GSDMD |
| 验证应用 | WB, IP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab209845 | Anti-GSDMD antibody [EPR19828] 本文产品 |
| Abcam | Ab219800 | Anti-GSDMD antibody [EPR20859] |
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| Abcam | Ab215203 | Anti-cleaved N-terminal GSDMD antibody [EPR20829-408] |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。