Bcl-2 染不出来，先看修复液
Anti-Bcl-2 [E17]，兔单抗，IHC-P 从 1/250 起
石蜡切片脱完蜡，柠檬酸缓冲液微波修复 15 分钟，一抗四度过夜，第二天 DAB 显到第 8 分钟才停。
片子拿出来，扁桃体生发中心该有的那圈棕色没出来，只剩一层浅黄。
把一抗从 1/500 提到 1/100，又染了一遍，还是浅黄。
卡住的不是浓度。
修复液决定表位露不露
Bcl-2 挂在线粒体外膜上，甲醛固定把附近的氨基交联起来，表位埋得比较深。柠檬酸 pH 6 的渗透力偏弱，这一类表位常常揭不开。
ab32124 的产品页把条件写死了：IHC-P 用 Tris/EDTA 缓冲液 pH 9.0 做热介导修复。这行字比任何经验都直接。
修复和浓度是两件事。修复决定表位能不能露出来，浓度只决定露出来的表位能不能被占满。表位还埋着，浓度加到 1/50 也是白加。
同一块组织分两半，一半柠檬酸一半 Tris/EDTA，其他步骤完全不动，这是最省事的对照。
这支抗体的适用范围
E17 克隆，兔重组单克隆，IgG 亚型，靶点是人的 BCL2。验证过的系统是 WB、IHC-P 和 IP。
稀释比分开给，三个系统三套数。IHC-P 1/250 到 1/500，WB 1/1000，IP 1/50。
有个边界要先看清：IHC 上厂家不推荐大鼠和小鼠样本。做小鼠模型又要看 Bcl-2，产品页给的去向是 ab182858，同一个靶点的另一个克隆。这不是抗体好坏的问题，是 E17 认的那段序列在小鼠里差了几个残基。
IP 的 1/50 是全表最浓的一档。免疫沉淀要的是把蛋白从裂解液里拉下来，逻辑跟显色不一样，别顺手沿用 WB 的 1/1000。
判读先看那一圈
Bcl-2 染的是胞质，落在线粒体膜上。正常生发中心有一圈明确的阳性，判读先看这圈在不在，再看深浅。
容易出问题的是坏死区边缘和修复过头的区域，那里会带上一层假阳性，颜色不深，但足以让阴性样本看起来像阳性。
同一张玻片上放一块不加一抗的对照，这一步省不掉。它便宜，而且能一次性排掉二抗和显色的非特异。
三条可以今天就改的
修复液换成 Tris/EDTA pH 9.0，高压或微波按实验室既有条件走，一次只改这一个变量。
一抗从 1/250 起。不要一上来就压到 1/100，背景一深，表达量的判断就跟着偏。
IP 走 1/50，裂解液先定量，按蛋白量算抗体，不按 WB 的上样量估。
下一批切片，先切一张扁桃体做阳性对照，跟样本放进同一个湿盒。修复液换了，一抗还留在 1/250。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | BCL2 |
| 验证应用 | WB, IHC, IP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/250 - 1/500 We do not recommend rat and mouse samples with IHC. Perform heat-mediated antigen retrieval with Tris/EDTA buffer pH 9.0 before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/1000 We recommend using ab182858 for murine samples.；IP 1/50 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab32124 | Anti-Bcl-2 antibody [E17] 本文产品 |
| proteintech | 12789-1-AP | human BCL2 Polyclonal antibody |
| proteintech | 68103-1-Ig | Bcl2 Monoclonal antibody |
| proteintech | 60178-1-Ig | BCL2 Monoclonal antibody |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。