要自己做偶联，就别用带 BSA 的抗体
p62 [2C11]，无载体无叠氮，可直接标记
想把 p62 直接标上荧光基团，做活细胞成像。
翻出冰箱里那支常用的抗体，配方里写着含 BSA 和叠氮钠。
这两样东西会跟标记试剂抢反应位点，标完的产物里一半是 BS，纯化也分不开。
无载体配方解决什么
常规抗体为了稳定，缓冲液里加牛血清白蛋白做载体蛋白，加叠氮钠防腐。
做偶联的时候，标记试剂是过量投加的，它不区分抗体和 BSA，两个都会标上。标完的混合物里，真正有用的那部分被稀释，后续纯化按分子量分，BSA 和 IgG 差得不够远。
叠氮钠的问题更直接，它含叠氮基，会跟某些化学标记体系反应，还会毒化后续偶联的酶。
ab56416 的配方是 carrier-free，不含 BSA 也不含叠氮钠，可以直接上标记反应。
产品页标的分子量是 48 千道尔顿，WB 上条带位置清楚，聚集体在上方形成拖尾。
这支抗体的数据
2C11 克隆，小鼠单克隆，IgG2a 亚型，靶点是人的 SQSTM1，也就是 p62。
验证的应用五个：WB、IHC-P、流式、ICC/IF 和 IP。
产品页给了两条固定破膜的参数，做 ICC/IF 的时候照着走：4% 多聚甲醛固定 15 分钟，pH 7.4；0.1% Triton X-100 冰上透化 15 分钟。这两步的时间是写明的，不用自己试。
流式的同型对照推荐 ab91361 或 ab18415。做胞内染色的时候，同型对照要跟一抗同浓度，不是同稀释比。
这支抗体的宿主是小鼠，亚型 IgG2a。做小鼠组织的多标时，二抗要选抗小鼠且经过小鼠血清吸附的，否则内源 IgG 会一起染上。
p62 的读法
p62 是自噬的底物，也是选择性自噬的受体。它在细胞里的分布比总量更能说明问题。
正常情况下胞质里是弥散的。自噬被阻断的时候，p62 聚成斑点，一个细胞里能数出好几个亮点。
免疫荧光上 p62 的斑点直径不大，共聚焦的针孔开大一点才看得清，针孔太小信号会暗到没法判断。
WB 上如果看到高分子量的 smear，说明泛素化蛋白聚集体在堆积，这时候总量升高不一定是转录上调。
三条操作建议
偶联之前先查缓冲液配方，含 BSA、明胶、叠氮钠的都换掉，或者用蛋白 A 纯化一遍再标。
标记反应按抗体摩尔数投料，不按体积。标完跑一次 WB 确认活性还在，偶联过度会让抗体失去结合能力。
标记完的抗体要加保护蛋白再保存，无载体的状态下浓度低，容易吸附到管壁上。
下一支要标荧光，直接从无载体的配方起订。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | SQSTM1 |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, IP |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG2a |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 推荐稀释 | IHC-P Perform heat mediated antigen retrieval with citrate buffer pH 6 before commencing with IHC staining protocol.；ICC/IF Fix cells for 15 minutes with 2 mL of 4% paraformaldehyde solution (pH 7.4 with NaOH in PBS). Permeabilize cells by incubating for 15 minutes on ice with 2 mL of 0.1% Triton X-100 in PBS.；Flow Cyt ab91361 or ab18415 - Mouse monoclonal IgG2a, is suitable for use as an isotype control with this antibody. We recommend Goat Anti-Mouse IgG H&L (DyLight ® 488) preadsorbed ( ab96879 ) secondary antibody |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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