S2 的信号卡在染色质上
兔多抗，人鼠酵母四物种，五类应用
核质分离做完，胞质那管上样跑 WB，S2 的条带比核里还清楚。
第一反应是分离试剂失效，换一批重做，还是这个结果。
问题不在试剂，在裂解强度。核膜破了不等于染色质散开，磷酸化 S2 的聚合酶大部分还挂在模板上，跟着没散开的染色质进了胞质那管。
为什么 S2 会黏在染色质上
聚合酶最大亚基的 C 端有一段七肽重复，YSPTSPS，反复很多次。S2 和 S5 的磷酸化对应转录的不同阶段，S5 多在启动子附近，S2 出现在延伸阶段。
进入延伸以后，酶已经脱离启动子，沿模板往前走，这时候它与 DNA 的结合更紧。温和裂解液只能破膜，打不断这种结合。
反过来的问题也常见，超声过度。染色质打断了，表位附近的序列也跟着散，S2 信号反而掉。功率和时间要固定，每批样本用同一套条件，别凭手感。
磷酸化状态本身也在变。激酶往上加，磷酸酶往下减，裂解液里放着不动，S2 信号会一路掉。
这支的事实
兔多抗，IgG，无标记，亲和纯化。缓冲液是 PBS 加 1% BSA，pH 7.4，含 0.02% 叠氮钠。
种属写了人、小鼠、大鼠、酵母四个。应用列了 WB、IHC、ELISA、IF/ICC 四项。
免疫原信息在产品页上是 proprietary，没有给出具体肽段。它对不同重复单元的偏好，只能自己用阳性样本摸。
纯化用的是抗原亲和纯化，柱子偶联的是免疫原。多抗的批间差异主要来自动物个体，同一批号内相对稳定，跨批号就得复核一次。
产品页没有给 WB 和 IHC 的稀释比。多抗批间差异比单抗明显，换批号要重跑一次阳性对照。
样本处理比稀释比更值得花时间
做 WB 先把核质分开，核组分单独裂解，裂解液里加 SDS 或者上超声，把染色质打断。超声条件按片段大小定，不要照抄别人。
产品页给的规格是 100 µg，浓度按批号有差别，第一次开管测一次 A280，实际浓度记在管盖上，后面配稀释比才有依据。
上样量按核蛋白定量，不要按全细胞蛋白定量。两个口径差好几倍，直接照搬会把对照跑歪。
做 IHC 的片子，修复不足时延长一抗孵育时间也补不回来，先把修复条件定下来。
收样时磷酸酶抑制剂现加。样本别在冰上搁太久，煮之前不要反复冻融。
三条操作建议
封闭用 5% BSA，别用脱脂奶粉，奶粉里的酪蛋白本身就是磷酸蛋白。
一抗 4°C 过夜，TBST 洗三次，每次十分钟。二抗室温一小时够了。
做 IHC 用柠檬酸缓冲液 pH 6.0，微波修复十五分钟，修复不到位片子是空的。
下次把核和胞质两个组分各上 20 µg，同一块胶并排跑。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Yeast |
| 抗原名称 | RPO21 pS2 |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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