145 kDa 的位置不一定准
兔多抗，CD45 白细胞共同抗原
脾脏单细胞裂解，跑 CD45，预期的位置有带，上面还压着一条更宽的。
换成胸腺样本，下面又多出一条。
CD45 有几个剪接异构体，不同细胞群表达的组合不一样。多抗认多个表位，这几种都能被拉下来。
异构体决定了条带形状
CD45 是白细胞共同抗原，胞内段有磷酸酶活性，参与 T 细胞和 B 细胞信号的起始。
几个外显子可以组合剪接，产物大小不同。幼稚 T 细胞和高记忆 T 细胞的组合不一样，跑出来的条带位置和宽度就不一样。
做组织样本时，多种白细胞混在一起，一条宽的弥散带很常见。这不是降解，是异构体叠加。
还原条件也改变条带形状，二硫键没打开时几条带会并成一团在高位。
判断降解还是异构体，看形状。连续的低分子量拖尾是降解，位置固定的第二条带多半是异构体。
这支的事实
兔多抗，IgG，无标记，亲和纯化。产品页标注分子量 145 kDa。
种属写了人、小鼠、大鼠。应用列了 WB、IHC、FCM 三项。
缓冲液是 PBS 加 1% BSA，pH 7.4，含 0.02% 叠氮钠。这一配方蛋白浓度高，取用前离心。
产品页没有给稀释比。多抗批间差异明显，做定量要固定批号。
产品页给了 UniProt 号和分子量，投稿写方法时可以照抄这两个信息。
用在什么样本上
脾、胸腺、淋巴结、外周血，白细胞占比高的样本，信号强，背景低。
做流式，CD45 常和 CD3、CD19 一起排门，先圈白细胞再分亚群，比在全事件里找阳性群干净。
实体瘤、脑、肝这类样本，白细胞是少数，上样量要给够，否则看不见。
脾脏样本红细胞多，裂解前先用红细胞裂解液处理一遍，血红蛋白会干扰蛋白定量。
做流式胞内染色，固定破膜后抗体识别的表位可能被破坏，先跑一次阳性对照确认。
做组织免疫荧光，CD45 用 1/200 起，膜染色配 DAPI 看核，别只看绿色通道。
浸润淋巴细胞的阳性比例，常用流式读，WB 只能给总量，两个结论不要互换。
三条操作建议
WB 上样 40 µg 组织裂解液，胶浓度 8%，让 145 kDa 的位置留足空间。
IHC 用柠檬酸 pH 6.0 修复，膜染色为主，注意区分胞质背景。
产品页把它归在流式类别，WB 和 IHC 也都能用，一支覆盖三类实验。
流式做表面染色，不要固定，CD45 是膜蛋白，固定后表位会变。
脾脏样本上样 40 µg 已经够，跑之前先确认裂解液里没有红细胞残留。
下次跑脾脏样本，同时上一管纯化的 T 细胞做对照，条带形状的差别一眼能看出来。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | PTPRC |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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