NeuN 的 IHC 稀释，是 1/3000
Anti-NeuN [EPR12763]，兔单抗，九种属交叉
脑片的免疫组化，一抗按常规配了 1/200。第二天显色，整个灰质全是棕，胞核和背景分不开。
翻产品页，IHC-P 的推荐稀释是 1/3000。
差了十五倍。
神经元标记为什么可以这么稀
NeuN 是神经元特异性核蛋白，在成熟神经元的核里含量高，抗原密度大。
脑组织里神经元排列密集，一片区域里有大量阳性核，信号叠起来很容易过。
浓度高了，背景先起来，核的边界反而糊。稀释到 1/3000，阳性核清晰，胶质细胞的阴性背景也干净。
剂型也有关系。未纯化的上清用 1/800，纯化过的浓缩液才能到 1/3000，产品页把两个数分开列了。
拿到管子先看标签上写的是上清还是纯化液，配液前对一遍。
上清里含培养基成分，保存期短，尽量三个月内用完。
这支抗体的参数
Ab177487 是 EPR12763 克隆，兔单克隆，IgG 亚型。
反应种属覆盖人、小鼠、大鼠、山羊、狗、猫、猴、鱼、羊，九种。
验证应用是 WB、IHC-P、流式胞内、ICC/IF 和多重免疫组化。
IHC-P 推荐 1/3000，未纯化的上清用 1/800，修复用 Tris/EDTA pH 9。WB 1/1000 到 1/10000，ICC/IF 1/100 到 1/300，流式胞内 1/100，同型对照 ab172730。
多重免疫组化里的注意点
mIHC 推荐 1/1000，修复走柠檬酸 pH 6，在每一轮酪胺信号放大之间做。目的是把上一轮的抗体洗掉。
这一步不能省。上一轮的抗体残留，下一轮的显色就会串，整张片子全是双阳。
每一轮的修复强度要一致。前面的轮次修得狠，后面的标记会越来越弱，看起来像是阴性。
轮次多了切片容易脱片，做多标的片子提前用防脱载玻片。
脱片救不回来，重新切一张比重染便宜。
判读上的事
NeuN 染的是核，胞浆阳性不算。
海马齿状回颗粒细胞层、皮层锥体细胞层都是强阳性，可以当作内参区看染色有没有成功。
内参区弱，整张片子都要重染，别硬着头皮往下分析。
损伤模型里 NeuN 阳性的细胞数会下降。计数按面积算密度，不要只报绝对数，切片厚度和取材位置一变，数字就没法比。
共聚焦拍片把激光功率固定住，不同片子之间才有可比性。
同一张玻片上的不同视野，增益也要一致。
下次配 NeuN，从 1/3000 起，先在正常脑片上试一张，再上实验组。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Goat, Dog, Cat, Monkey, Fish, Sheep |
| 抗原名称 | NeuN |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, MIHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/3000 For unpurified use at 1/800. Perform heat-mediated antigen retrieval with Tris/EDTA buffer pH 9.0 before commencing with IHC staining protocol.；mIHC 1/1000 Perform Sodium citrate antigen retrieval (pH 6.0) in between rounds of tyramide signal amplification to remove the antibody from the previous round, to avoid any cross-reactivity. Perform heat-mediated antigen retrieval with citrate buffer pH 6 before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/1000 - 1/10000 For unpurified use at 1/1000 - 1/2000.；ICC/IF 1/100 - 1/300 For unpurified use at 1/80. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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