核质分离做完，Lamin B1 不该漏进胞质
Anti-Lamin B1，兔多抗，核膜标志物
核质分离做完，胞质和核两个组分各跑一管 WB。
Lamin B1 在核组分里很强，在胞质组分里也有一条浅带。
你安慰自己说这是上样带过去的。审稿人不这么看。
这条浅带说明什么
Lamin B1 是核纤层蛋白，正常情况下只出现在核膜内侧。
胞质组分里出现条带，通常是分离不彻底，核膜破裂或者核仁泄漏。
也可能是细胞在收样时已经凋亡，核膜解体，蛋白跑到胞质里。
不管是哪种，定量核蛋白的时候，这个污染会直接影响结论。
跑一次标志物花不了多少时间，能省掉后面整批返工。
标志物要跨组分选，核一个、胞质一个，两边互查。
这支抗体的参数
Ab16048 是兔多克隆，靶点 LMNB1，反应种属包括人、小鼠、大鼠，标注核膜标志物。
验证应用是 WB、IHC-P 和 ICC/IF。
产品页没有给推荐的稀释比，各个系统要自己摸。
多克隆的批间差异需要留意。做定量比较的课题，尽量用同一批号做到结束。
核膜标志物的条带强弱和细胞状态关系很大，对数期和长满的细胞不一样。
长满的细胞核膜更完整，分离反而容易做得干净。
分离条件的调整
裂解液里去污剂的浓度决定核膜的完整性。0.1% 和 0.5% 的结果不一样，从低浓度试起。
浓度低裂解不彻底，胞质里会混进完整的细胞，两头都要看。
匀浆的力度也要控制。过度匀浆会把核打碎，打碎的核沉不下去。
手动匀浆器比电动的好控制，二十下左右就够。
离心速度不够，核留在胞质相里，胞质组分就带上核蛋白。
离心温度也要控制。四度离心，室温离心会让蛋白降解。
离心前把转子预冷，管子也预冷。
分离完先跑一次标志物，Lamin B1 和胞质标志物各看一条，确认两管没有交叉再往下做。
有丝分裂期的样本
细胞进入有丝分裂，核膜解体，Lamin B1 分散到胞质。
同步化的样本做核质分离，胞质组分里出现 Lamin B1 是正常的。
要研究这个现象，得同时看细胞周期标志物，确认同步化的效率，否则分不清是污染还是真实分布。
同步化效率不到七成，这个实验的结果就很难解释。
分好的组分先冻起来，避免反复冻融。冻之前留一份做蛋白定量，后面上样量才对得齐，核组分读数偏低，稀释倍数要算准。
下一次分离，离心速度提高一档，匀浆少打五次，再看胞质那管的 Lamin B1。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | LMNB1 |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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